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西安瑞丰仪器小编总结荧光显微镜成像质量的决定因素

西安瑞丰仪器小编总结荧光显微镜成像质量的决定因素

荧光光学系统的成像质量主要取决于像的衬度和像的亮度,像的衬度是由样品中激发出的荧光与背景上观察到的光之比决定的。背景光包括透过截止激发光的滤色片的杂散激发光,样品组织成分的自发荧光和光学系统的自发荧光和杂散光,在荧光显微术中尽全力要解决的是既获得较佳的像衬度,同时又维持像有足够亮度,这两者往往是矛盾的。例如用窄波带滤色片激发时仅利用了极少的光能,背景暗了但荧光亮度也弱了。在应用时,只能兼顾,合理的权衡以决定取舍。

荧光显微光学系统需要优先考虑的是:

(1) 光学系统组成的材料应选用在激发光波内无荧光材料,不但指光学系统玻璃也包括胶合制造中的胶合剂、切片、盖玻片和浸液以及密封剂。若有自发荧光,不但会增加背景光,有时还会混淆观察荧光图像。

(2) 光学系统的参数选择中, 应将获得较大光能作为di一考虑因素。

大标本成像系统.jpg

照明系统中集光镜应选用较大的包容角; 采用柯勒照明并使灯丝或弧光像充满入瞳,以期望获得高效率的均匀照明。

收集荧光成像的物镜,因为像面照度与数值孔径NA 2 成正式,为此作为荧光用物镜应有较大的NA值。目前10×已达015;20×达0175;40×达019;油镜40×达113。

双目镜筒作为荧光用时应在可见光谱段有较高的透过率,采用镀膜技术可大大地减少光能的损失,它可比一般双目镜筒透射率提高一倍,这对弱荧光物质观察是必须的。

目镜放大率不宜选大,因为象面照度与目镜放大率平方成反比。若其它条件相同,当用613×目镜时,照度定为100% ,换上1215×时,照度约为25%,因此常在4×~ 613×之间选用。

(3) 作为荧光光学系统各组成部件的光谱特性也是至关重要的,特别是紫外光要通过的部件,如照明系统,聚光镜以及物镜,要关注紫光区的透射系数。聚光镜要选用透紫外线的材料。照明系统中反光镜表面镀铝比镀银好,因为铝在UV 和V 区反射率在90% 以上,而银仅达70%。加拿大胶吸收紫外线,在紫外区通过处不宜用作胶合剂。

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