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西安标本成像系统的双光子显微的特点都有哪些

西安标本成像系统的双光子显微的特点都有哪些

西安标本成像系统双光子吸收率依赖于两个入射光子在空间和时间上的重合程度。双光子吸收截面很小,只有在具有很大光子流量的区域,荧光团才会被激发。因此所用激光器多为钛激光器,可以达到 ps 或 fs 级的扫描速度,且具有非常高的峰值功率和较低的平均功率,从而可以减小或消除光漂白和光毒作用带来的不利影响。

而在一个很小的范围提供高密度光子,保证了双光子的同时激发。双光子激发过程如下。在激光照射下,基态荧光原子或分子同时吸收两个光子而成激发态。如还原型烟酰胺腺嘌岭二核苷酸酶,在单光子激发时,在350 nm光的激发下产生450 nm荧光;而在双光子激发时,可采用温和的红外或近红外光,如750 nm激光下得到450 nm荧光。这既避免了紫外光对样品的伤害和使用紫外光学元件的许多限制,又可延长对活体生物样品的观察时间,为研究氨基酸、蛋白质和神经递质等提供了独特而重要的方法。

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由于双光子激发需要很高的光子密度,为了不损伤细胞,TPM 使用高能量锁模脉冲激光器。大标本成像系统这种激光器发出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,其脉冲宽度只有 100 fs,而频率可达80~100 MHz。

双光子激发的基本原理是,在高光子密度下,荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子,在经过很短时间,即所谓激发态寿命后,发射出一个波长较短的光子。其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子相同。

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